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冠突散囊菌化学成分及其抗氧化活性研究冠突散囊菌(Eurotiumcristatum)是茯砖茶在“发花”过程中形成的一种具有益生性能的优势菌,俗称“金花”。由于冠突散囊菌的存在,使得茯砖茶的色、香、味得以不同于其他茶类,并具有抗氧化、促消化、降脂减肥、抑菌、抗癌等保健功效,因此人们日益重视冠突散囊菌的功能研究。本研究采用米饭培养基对冠突散囊菌进行固体发酵,对其化学成分、活性及调控发酵进行研究,研究结果如下：冠突散囊菌固体发酵后,通过液液萃取得到了4个极性部位：石油醚相(ECPE)4.0g、乙酸乙酯相(ECEA)12.0g、正丁醇相(ECBU)9.0g和水相(ECWA)245.0go。利用HPLC分别对总提物与4个萃取部位进行分析,并对其抗氧化活性进行体外评价。采用系统的分离方法,经过液-液萃取、减压硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、HPLC等手段,从乙酸乙酯相中分离、纯化并鉴定了11个化合物,分别为：
(1)7-羟基大黄素(7-Hydroxyemodin),(2)大黄素(Emodin),(3)Physciondianthrone,(4)大黄素甲醚(Physcion),(5)邻苯二甲酸二丁酯(PalatinolC),(6)VariecolorinO,(7)NeoechinulinA,(8)羟基大黄素(Citreorosein),(9)2,-二羟基大黄素(2,-dihydroxyemodin),(10)海胆灵(echinulin),(11)内黄素(Endocrocin)。
抗氧化试验结果显示：冠突散囊菌石油醚提取物清除DPPH和ABTS+自由基(IC50分别为0.078和0.083g·L-1)的能力均比乙酸乙酯提取物清除能力(IC50分别为0.212和0.126g·L-1)强；正丁醇提取物对DPPH和ABTS+自由基几乎没有清除作用,3种提取物清除DPPH和ABTS+自由基的能力均比阳性对照Vc(IC50分别为0.032和0.024g·L-1)弱；铁离子还原／抗氧化能力(FRAP)测定法结果显示其抗氧化能力顺序为：石油醚部位>乙酸乙酯部位>正丁醇部位>总提物>水部位。但总提物与正丁醇和水部位均没有清除ABTS+和DPPH自由基及还原铁的能力；化合物6、7均显示出了抗氧化活性,其中化合物6清除ABTS+和DPPH自由基的能力均最强,其IC50分别为0.041、0.099g·L-1,且2个化合物的抗氧化能力呈剂量依赖；化合物1、2、5、8、10均没有清除ABTS+和DPPH自由基的能力,所有7个测试化合物清除DPPH和ABTS+自由基的能力均比阳性对照Vc(IC50分别为0.027和0.023g·L-1)弱。
本研究还探索了药物对冠突散囊菌的代谢调控,并采用混合发酵的方式与不同细菌进行共培养发酵,利用HPLC对乙酸乙酯提取物进行化学指纹分析。
结果表明：烟酰胺、伏立诺他、5-氮杂胞嘧啶核苷对冠突散囊菌的代谢调控均显示出负调控的效果,Vc对冠突散囊菌没有代谢调控效果；金黄色葡萄球菌(Staphyloccocusaureus)对冠突散囊菌的代谢调控显著,刺激产生大量新物质,可成为冠突散囊菌发酵的新研究方向;肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis).粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)对冠突散囊菌的代谢调控均有一定的作用,但并不显著。
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