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普洱茶联合化疗药物的增敏及保护作用研究

癌症已成为人类健康的头号威胁,严重的影响着人们的生活。而乳腺癌作为女性中最常见的肿瘤,给全球许多女性和家庭带来了不安。世界范围内,每年近50万女性死于乳腺癌的数据,也在警示着我们这种癌症的危害性。而我国的统计数据表明,每年新增的乳腺癌病例数高居所有癌症发病数的第二位,而随着诊断技术的提高,这个数据仍会不断升高。过去的半个多世纪里,化疗药物的发现、发展、改进给无数的患者及家庭带来希望,并在很大程度上改善了患者的生活质量,延长了患者的寿命,成为临床医生很好的帮手。但化疗药物较多的副作用,如恶心、呕吐、免疫力低下、心脏毒性、基因毒性等,同样给患者带来痛苦,因此也限制了其更好地为人类服务的本意。虽然科学家们和临床医生都想尽办法的改进、降低其副作用,但效果却不甚理想。目前为止,化疗药物的副作用仍是医生和患者面临的重大挑战。作为云南产量丰富的普洱茶,不仅有着悠久的饮用历史,其多种保健功能也逐渐的被发现、应用起来。近年来发现的其抗肿瘤、防癌的功效,更是吸引了大量研究人员和临床医生的注意。

本实验室之前的研究发现,普洱茶可以通过降低突变p53的表达,来抑制携带突变p53的小鼠肿瘤细胞的生长,从而起到抑制肿瘤发展的作用。而普洱茶联合化疗药物针对人肿瘤细胞及正常细胞的研究相对有限,于是本课题以乳腺癌细胞系T47D、MDA-MB-468,乳腺正常上皮细胞MCF-10A,结肠癌细胞HT-29为研究对象,研究普洱茶联合化疗药物——阿霉素、顺铂、环磷酰胺、紫杉醇对这些细胞的作用。我们首先通过黄酰罗丹明B比色法检测(SulforhodamineB,SRB实验)普洱茶联合这些化疗药物对细胞增殖的影响。

结果表明,普洱茶联合阿霉素后,不影响阿霉素对乳腺癌细胞系T47D、MDA-MB-468、结肠癌细胞HT-29的杀伤作用,而能显著改善阿霉素对正常细胞MCF-10A的毒害作用。同时,我们在显微镜下观察了普洱茶联合阿霉素及阿霉素单独处理MCF-10A细胞的增殖情况,也发现联合处理后,存活的细胞数明显的增多,表明联合处理确实降低了阿霉素对正常细胞的杀伤。而对普洱茶联合顺铂、环磷酰胺、紫杉醇的研究则表明,普洱茶对正常细胞MCF-10A则没有明显的保护作用。我们从分子水平上进一步探讨这种保护作用的机理。Westernblot的结果表明普洱茶联合阿霉素后,阿霉毒引起的凋亡信号通路中的蛋白:Caspase8、Caspase3、PARP的切割均显著减少。表明这种保护作用是通过降低阿霉素引起的细胞凋亡来实现。同时,由于阿霉素是DNA毒性药物,所以我们探索了DNA损伤信号通路的变化情况。如我们预料的一样,普洱茶联合阿霉素后DNA损伤的标志-H2AX、p53及磷酸化p53(p-p53)的表达均显著降低。这些结果表明,联合处理后阿霉素对细胞DNA的损伤明显降低。提示我们DNA损伤的降低可能也对这种保护起到一定作用。我们还采用了脉冲场凝胶电泳实验来进一步证实DNA损伤的情况,结果与westernblot的一致。由于怀疑到普洱茶可能会通过与阿霉素相互作用,从而影响阿霉素进入细胞或者降低阿霉素对正常细胞的杀伤,所以我们设计了荧光实验来评价这种可能性。荧光实验的结果表明,普洱茶未影响阿霉素进入细胞。我们又试图通过高效液相色谱层析技术(HPLC)来确认两者间的作用。但由于我们使用的药物浓度低于HPLC检测的限度,所以未能确认两者是否有相互作用。此外,我们还初步探索了普洱茶对携带突变p53的乳腺癌细胞T47D、结肠癌细胞HT-29中突变p53表达情况的作用,未发现有明显的影响。在对普洱茶中几种成分槲皮素、EGCG、咖啡因、没食子酸等联合阿霉素处理MCF-10A的初步探索中,亦未发现其有保护作用,表明普洱茶联合阿霉素后的保护作用可能是普洱茶中其他成分发挥的作用。综上所述,普洱茶联合阿霉素后可以降低阿霉素对正常细胞的毒害,而不影响阿霉素对肿瘤细胞的杀伤,且这种作用不是通过阻止阿霉素进入细胞来实现的,而是通过降低阿霉素引起的细胞凋亡及DNA损伤来实现的。普洱茶在联合其他化疗药物时,则没有明显的作用。该研究为利用普洱茶联合阿霉素进行后续的动物实验,提供了坚实的基础。(本文节选自2015年昆明理工大学硕士学位论文)

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