【www.cy260.com - 普洱茶】
普洱茶发酵过程中微生物群落结构动态分析渥堆是普洱茶生产的关键工艺,渥堆阶段微生物数量远远高于普洱茶制作的其他阶段,微生物生命活动和代谢产物是普洱茶品质形成的重要因素。传统普洱茶发酵工艺易受环境因素和人为因素影响,生产周期长、品质不稳定。改进普洱茶生产工艺的根本在于传统渥堆发酵中微生物群落结构和多样性的基础研究。真菌被认为在普洱茶制造的关键阶段发挥作用,对普洱茶发酵产生的独特香气和风味有贡献,细菌起辅助作用。
本文运用PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)分子生物学技术对普洱茶发酵过程中微生物群落结构进行分析,研究并比较了四种普洱茶发酵样品微生物总DNA提取方法的提取效果。探讨了TouchdownPCR和NestedPCR扩增策略对目的产物多样性的影响,且确定出DGGE的最佳电泳条件。在此基础上,分别基于真菌的18SrDNA-NS31/Glol基因和细菌的16SrDNA-V3基因对普洱茶发酵过程中的真菌和细菌群落结构进行了分析。通过DGGE优势条带的切胶回收及测序鉴定获取了普洱茶发酵过程中微生物种群结构动态变化信息。以期使接种专用优势菌剂用于普洱茶的发酵生产成为可能,从而保证普洱茶产品质量的稳定性和规范化、工业化生产。
主要研究结果如下：
1.本试验建立了检测普洱茶发酵过程中微生物群落的PCR-DGGE体系。研究结果表明,普洱茶发酵微生物总DNA提取方法以变性剂法为佳。以NestedPCR扩增获得的18SrRNANS31/Glol基因片段和16SrRNAV3基因片段的多样性更丰富。通过对DGGE体系的优化得知,选用变性梯度为45%-65%的聚内烯酰胺凝胶在100V电压下电泳12h条件下的真菌条带效果最佳,DGGE图谱的条带分离结果清晰、丰富。细菌V3可变区基因片段的最佳变性凝胶梯度电泳条件是：变性剂浓度35%-65%,100V,电泳12h。
2.按照实验已经确定的总DNA提取方法、PCR扩增策略、DGGE电泳条件,对普洱茶不同发酵时期的6种样品进行微生物群落结构分析。可知普洱茶原料优势真菌为SaccharomycesCerevisiae,且始终作为优势菌。随着发酵的进行,Aspergillusniger逐渐生长,二翻、三翻相对数量明显增大,随后数量相对降低,但始终保持优势地位。Penicilliumglabrum从第一次翻堆开始增加成为优势菌,直到最后。
3.对普洱茶发酵六个时期的细菌群落结构进行分析,占统治地位的细菌主要包括乳杆菌属、芽孢杆菌属和高温放线菌属,此外还有欧文氏菌、假单胞菌、大肠杆菌、产气肠杆菌和树状微杆菌。普洱茶原料和发酵初期样品中的优势细菌包括：产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes)、假单胞菌(Pseudomonassp.)、欧文氏菌(Erwiniasp.)、苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)、树状微杆菌(Microbacteriumarborescens)、肠杆菌(Enterobactersp.)、短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。随着微生物代谢热量的释放,渥堆温度逐渐升高,耐热微生物大量繁殖,包括凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、嗜热淀粉芽孢杆菌(Bacillusthermoamylovorans)和高温放线菌属(Thermoactinomyces)。发酵后期细菌种类明显减少,出堆时只检测到高温放线菌(Thermoactinomycessp.)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的存在。（本文节选自2012年天津科技大学学位论文）
品，细品，茶叶网cy260.com的优秀编辑为您独家提供优质茶叶知识相关文章，《普洱茶发酵过程中微生物群落结构动态分析》一文将帮助你了解茶叶知识相关方面的知识，如果还想进一步了解关于2022茶叶知识方面知识请访问普洱茶专题。
