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普洱茶减肥机制的探讨
黄建、郝洋、陶鑫、饶兴蔷、黄智、戚康标
中山大学生命科学学院
【摘要】根据3肾上腺素能受体与脂肪代谢有密切的联系为理由，采用昆明种小白鼠为材料，试图探讨普洱茶的减肥机制。实验设计普洱茶生茶、熟茶与无咖啡碱茶（可可茶）三种茶的低中高浓度，喂以小白鼠高脂饲料，最后检测小白鼠的3肾上腺素能受体表达量和体重变化等指标。结果显示：喂以小鼠普洱茶生茶的3肾上腺素能受体表达量最高，普洱茶熟茶次之，无咖啡茶则不明显。初步推测，普洱茶的减肥机制可能与茶叶中咖啡碱的作用有关，通过咖啡碱的作用，调高3肾上腺素能受体的表达水平来达到减肥的目的。
【关键词】普洱茶；可可茶；3肾上腺素能受体；减肥；咖啡碱
目前有实验表明大多数茶叶具有减肥作用[1-4]，但由于茶叶的成分复杂，对减肥的机制还不是十分清晰，有的认为茶叶的减肥与茶叶中的茶多酚有关，也有的认为与茶叶中咖啡碱有着密切的联系[10]。近期关于减肥机制的研究显示，3肾上腺素能受体与脂肪代谢有密切的联系，通过刺激线粒体解耦联蛋白基因（ucp）的转录，从而引起电子转移与氧化磷酸化解耦联而生热最终达到减肥的目的[5-9、13]。
普洱茶是人们普遍饮用的一类茶叶，依制作工艺不同分生茶与熟茶：生茶是由未经人工渥堆发酵的云南大叶种晒青毛茶压制而成；熟茶以晒青毛茶为原料，经过渥堆发酵等工艺加工而成。可可茶（CamelliaptilophyllaChang）是基本上不含咖啡碱的特种茶。
本实验旨在通过研究普洱茶生茶和熟茶与可可茶的减肥效果，评价这两类含咖啡碱和不含咖啡碱茶对3肾上腺素能受体基因表达水平的影响来进一步探究普洱茶的减肥机制。
1实验材料与仪器试剂
1.1实验材料110只昆明种小白鼠，全为雌性，由中山大学医学院提供。不同浓度可可茶和普洱茶茶汁制备：根据浓度的不同取对应的茶叶于80℃蒸馏水浸渍30min然后过滤得到实验用茶汁。低剂量（每毫升浸出液相当于0.027g茶叶）；中剂量（每毫升浸出液相当于0.08g茶叶）；高剂量（每毫升浸出液相当于0.24g茶叶）。高脂肪饲料配方：每100g普通粉状饲料中添加10g猪油、l0g全脂奶粉、10ml鱼肝油、60g鸡蛋。
1.2实验试剂乙醚麻醉剂，TrizolReagent试剂盒，灭菌DEPC水，RNA酶抑制蛋白，AMV逆转录酶，基因特异性引物，TaqDNA聚合酶，10×PCRbuffer:100mmol/LTris-HCl(PH=9),500mmol/LKCl溶液，15mmol/LMgCl2溶液，0.1%TritonX-100。
1.3实验仪器电子天平，养鼠设备，1ml灌胃针11只，冷冻高速离心机，PCR仪，紫外分光光度计。
2实验方法
2.1小白鼠选购与预先准备选择110只健康小白鼠（全为雌性），体重在20.0～23.0g，按体重随机分11组（每组10只）：基本饲料组对照组、高脂饲料对照组、高脂饲料生饼普洱茶组（低剂量0.027g/ml、中剂量0.08g/ml、高剂量0.24g/ml）、高脂饲料熟饼普洱茶组（低剂量0.027g/ml、中剂量0.08g/ml、高剂量0.24g/ml）和可可茶组（低剂量0.027g/ml、中剂量0.08g/ml、高剂量0.24g/ml）。用染料（龙胆紫染料）
涂在鼠身上将每组编号。
2.2小鼠饲养灌胃小鼠在空调动物环境温度25℃左右，湿度70%左右饲养；按一天0.3ml/只的量(因小鼠质量和身体表面积比是人类的10倍，确定中剂量)，每日中午定时给实验组灌以相应浓度的普洱茶或可可茶，基础饲料对照组和高脂饲料对照组则灌以蒸馏水。根据每kg小鼠每日平均消耗量按20g小鼠每日6g左右，每日定量喂饲灭菌的基础或高脂肪饲料，自由饮水。记录每天饲料摄食量和灌茶量，每隔3d测量小鼠体重，连续喂养28天。
2.3脂肪组织中3肾上腺素能受体（3adrenergicreceptor）mRNA水平
2.3.1总mRNA的提取培养28天后用乙醚麻醉取小鼠腹膜后的脂肪组织0.2mg，用TrizolReagent（Invitrogen）处理法提取总RNA。所接触RNA的试剂及试剂用水均用DEPC水配制。所有接触RNA的器械及容器要用0.1％的焦碳酸二乙酯(DEPC)浸泡过夜，然后在l60℃条件下，高压灭菌30min。
2.3.2RNA纯度测定取适量RNA溶液，用分光光度计检测，通过波长在260nm和280nm的吸光度的比值(A260／A280)判断RNA纯度，通过琼脂糖凝胶电泳检查其完整性。
2.3.3cDNA制备(SYBRPrimeScriptRT-PCRKit)照下表建立反应体系，反应条件为：37℃15min，85℃5s。
2.3.4荧定量光PCR(SYBRPrimeScriptRT-PCRKit）利用实时荧光定量PCR检测各组小鼠的脂肪组织中3-肾上腺素能受体的表达量。按下列组份配制PCR反应液。
3实验结果
3.1小鼠平均体重增量变化实验过程中各组小鼠未见明显异常，饮食、活动状况良好。实验期间各组小鼠总摄食量无明显差异，小鼠的体重增量变化如表3所示：
将小鼠的增重情况绘成图1～4进行分析，由图1普洱茶生茶组中看出，高浓度组小鼠体重增重显著低于基础对照组，中、低浓度组小鼠体重增重与基础对照组相近，且显著低于高脂对照组。在图2普洱茶熟茶组中，低浓度的熟茶组小鼠体重增重与高脂对照组相近，高、中浓度的熟
茶组体重增重高于基础对照组，且显著低于高脂对照组。图3的可可茶组中，三种浓度组的小鼠体重增重高于基础对照组，且与高脂对照组相近。另外分别取出生饼中、熟饼中、可可中、对照高和基础对照组进行比较，结果体重增重为：基础对照＜生饼中＜熟饼中＜可可中＜对照高
（图4）。
3.2各组小鼠脂肪组织中3-AR表达量利用实时荧光定量PCR检测发现，各浓度的生茶和熟茶组小鼠的脂肪组织中3-肾上腺素能受体的表达量都明显高于对照组的，且同种茶不同浓度的小鼠脂肪组织中3-肾上腺素能受体表达量有明显差异。可可茶各浓度组小鼠脂肪组织中3肾上腺素能受体的表达量略高于对照，但各浓度的表达量变化不大（图5）。
4讨论
国内外研究认为，茶叶中存在着许多活性成分，主要为多酚类和咖啡碱[10]，这些生物活性物质在体内可使胃肠道和胰腺的脂肪酶活性下降，降低脂肪酸合成酶活性，并增加脂肪分解和能量消耗、促进脂肪的分解[11-14]，也有研究指出，普洱茶中降血脂的有效成分与他汀类化合物有关[1]，从而使得血清甘油三酯减少，进而达到减肥降脂的效果。3肾上腺素能受体（3-AR）主要位于脂肪细胞，与能量代谢及脂肪分解作用密切相关。实验表明3-肾上腺素受体变异而热量消耗少者，肥胖症的发病率均明显高于正常人[10-11]。其机制在白色脂肪组织和棕色脂肪组织中不同。在棕色脂肪组织中，3-肾上腺素受体可刺激线粒体解耦联蛋白基因（UCP）的转录，UCP可作为线粒体内膜上的质子通道，消除膜内外的质子梯度，增加线粒体呼吸，阻止ATP合成，从而释放能量，最终达到消耗脂肪减轻体重的目的。在白色脂肪组织中，3-肾上腺素能受体主要通过分解脂肪和释放脂肪酸供机体利用，减小白色脂肪组织的细胞体积，达到减轻体重的作用[13]。
普洱茶一般含有相当于干物质1-3%的咖啡碱，有研究分析咖啡碱与3肾上腺素能受体的表达水平有直接联系，一般认为咖啡碱可以调高3肾上腺素能受体的表达水平，但普洱茶中的咖啡碱是否通过调高3肾上腺素能受体的表达水平来实现减肥的效果。在实验中选取含咖啡碱的普洱茶生茶和熟茶与不含咖啡碱的可可茶作为材料对小鼠的减肥机制进行探究。设计了三种茶的低、中、高浓度灌予小鼠，同时喂以高脂饲料。每隔3d测量小鼠体重，连续饲养28天后，对小鼠平均体重增量进行分析，结果发现在三种茶中，普洱生茶组的小鼠体重增量最小，熟茶次之，可可茶的小鼠体重增量与高脂对照组相近。生茶和熟茶中高浓度的小鼠体重增量明显小于低浓度。由此，可以初步判断三种茶减肥效果的
能力：生茶＞熟茶＞可可茶。
由于普洱生茶和熟茶含有咖啡碱[15]，而可可茶不含咖啡碱。通过荧光定量PCR来检测3肾上腺素能受体表达量的水平，以进一步分析普洱茶的减肥机制。利用FQ-PCR检测3-AR表达水平得到，普洱茶生茶高、中、低三种浓度的3-AR0.101、0.152、0.204，表明普洱茶生茶组小鼠随着浓度的升高，其3-AR的表达水平也呈近直线的方式增高。在三种不同浓度的普洱茶熟茶中3-AR的表达水平分别是0.122、0.163、0.131，3-AR的表达水平也有明显升高的趋势。而三种不同浓度的可可茶3-AR的表达水平分别是0.114、0.123、0.107，表明可可茶各浓度组小鼠脂肪组织中3肾上腺素能受体的表达量明显低于普洱茶生茶和熟茶组。结果表明，3-AR表达水平普洱茶生茶＞熟茶＞可可茶＞对照组。
综合上述实验结果，我们发现3-AR表达水平与茶叶中的咖啡碱含量具有一定的相关性。由于普洱茶中的咖啡碱具有降低脂肪酸合成酶活性，并增加脂肪分解和能量消耗、促进脂肪的分解的作用，而可可茶中则基本不含咖啡碱，因此，我们推测咖啡碱有可能是通过调高3-AR的表达水平来实现减肥的。但由于茶叶中的成分较为复杂[19]，所以还不能完全的肯定。要做进一步的证实，可以通过提取纯化的普洱茶中的咖啡碱，直接作用于小鼠脂肪细胞后，再检测其3-AR的表达水平来进行验证。
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